Sau hàng loạt phim Việt khai thác đề tài về tình cảm gia đình đầy xúc động, khán giả mong muốn tìm kiếm những tiếng cười sảng khoái đang đón chờ phim Tía Tui Là Cao Thủ với sự xuất hiện của "vợ chồng Nho Nhã" Hoài Linh- Việt Hương. Tía Tui Là Cao Thủ xoay quanh câu chuyện về một gia đình làm nghề thuốc Đông y. Ông bà Nho Nhã nổi tiếng khắp làng với tài “phóng kim châm chữa bệnh” có một không hai. Họ sống yên vui, hạnh phúc bên bốn người con đều là những nam thanh nữ tú tại một vùng quê yên bình. Cho đến một ngày nọ, bà Nhã (Việt Hương) vì giận chồng mình (Hoài Linh) vẫn khăng khăng giữ kỉ vật của tình đầu bên mình nên đã dẫn các con gồm Ái Phương, Khả Như, Ngô Kiến Huy lên thành phố, "ôm theo" số tiền đền bù đất đai. Ông Nho sau đó đành ở lại quê nhà cùng chàng Út (Hoài Lâm). Thế nhưng, cuộc sống nơi đất khách quê người không dễ thở như mẹ con bà Nhã từng nghĩ. Vốn thật thà, dễ tin người, họ đã bị một nhóm người giăng bẫy để rơi vào con đường sai trái. Người đứng đầu của nhóm người là một người phụ nữ có hành tung bí ẩn và nhiều bất ngờ. Ai sẽ là người giải cứu họ khỏi những cạm bẫy để trở lại cuộc sống yên bình trước đây?